尼康 TS2 顯微鏡是一款常用于生物學研究的儀器，以下是使用它觀察動物細胞細胞器的一般步驟：

尼康 TS2 顯微鏡樣品準備

細胞培養(yǎng)：選擇合適的動物細胞系，如 HepG2 細胞（人肝癌細胞系），在細胞培養(yǎng)瓶中使用含 10% 胎牛血清、1% 雙抗（青霉素 - 鏈霉素混合液）的 DMEM 培養(yǎng)基，置于 37℃、5% CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞固定：當細胞生長至匯合度約 80% 時，棄去培養(yǎng)基，用 PBS 緩沖液輕輕洗滌細胞 2 - 3 次。然后加入適量 4% 多聚甲醛溶液，室溫下固定 15 - 20 分鐘。

細胞通透：固定完成后，吸去多聚甲醛溶液，用 PBS 洗滌 3 次，每次 5 分鐘。接著加入 0.1% Triton X - 100 的 PBS 溶液，室溫孵育 10 - 15 分鐘，使細胞膜具有通透性。

封閉：用 PBS 洗去 Triton X - 100 溶液，然后加入含有 5% 牛血清白蛋白（BSA）的 PBS 溶液，室溫封閉 30 分鐘，以減少非特異性結合。

抗體孵育：

吸去封閉液，加入稀釋好的特異性一抗，如抗線粒體的兔多克隆抗體（1:100 稀釋），4℃孵育過夜。

次日，用 PBS 洗滌細胞 3 次，每次 10 分鐘，以去除未結合的一抗。

加入相應的熒光標記二抗，如山羊抗兔 IgG - FITC（異硫氰酸熒光素標記，1:200 稀釋），室溫下避光孵育 1 - 2 小時。

孵育結束后，用 PBS 洗滌 3 次，每次 10 分鐘，洗去未結合的二抗。

細胞核染色：用含有 DAPI（4',6 - 二脒基 - 2 - 苯基吲哚）的染液對細胞進行染色，終濃度為 1 μg/mL，室溫下避光染色 5 - 10 分鐘。染色完成后，用 PBS 洗去多余的 DAPI 染液。

封片：在載玻片上滴加適量的抗熒光淬滅封片劑，然后將細胞爬片小心地轉移到載玻片上，蓋上蓋玻片，盡量避免產生氣泡。

尼康 TS2 顯微鏡顯微鏡設置

光源調節(jié)：打開汞燈或 LED 光源，預熱 15 - 30 分鐘，使光源穩(wěn)定。根據熒光染料的激發(fā)波長，選擇合適的激發(fā)光濾光片組。例如，對于 FITC 標記的細胞器，選擇藍光激發(fā)濾光片組；對于 DAPI 標記的細胞核，選擇紫外光激發(fā)濾光片組。

物鏡選擇：根據觀察需求和細胞大小，選擇合適的物鏡。低倍物鏡（如 10×）可用于觀察細胞整體分布，高倍物鏡（如 40×、63× 或 100× 油鏡）用于觀察細胞器的細節(jié)。觀察細胞器一般使用 63× 或 100× 油鏡以獲得高分辨率圖像。

光路調整：

調節(jié)聚光鏡的高度和孔徑光闌，使光線均勻照亮樣品。對于高倍物鏡，適當減小孔徑光闌可提高圖像對比度。

在熒光觀察時，通過調節(jié)熒光光路中的反射鏡和透鏡，確保激發(fā)光準確照射樣品，且發(fā)射的熒光能有效被收集和成像。

尼康 TS2 顯微鏡觀察與分析

定位細胞：將制備好的樣品放在載物臺上，用低倍物鏡找到細胞群體，調節(jié)粗準焦螺旋和細準焦螺旋使細胞圖像清晰。移動載物臺，選擇細胞形態(tài)良好、分布均勻的區(qū)域進行觀察。

切換高倍物鏡：在低倍物鏡下確定觀察區(qū)域后，小心切換到高倍物鏡，注意避免物鏡碰到樣品。切換后，微調細準焦螺旋使細胞器圖像達到最佳清晰度。

觀察細胞器：根據熒光標記的顏色和位置觀察細胞器分布。如線粒體被 FITC 標記為綠色，呈點狀或短棒狀分布于細胞質中；細胞核被 DAPI 標記為藍色，位于細胞中央?？捎^察細胞器的形態(tài)、數量、分布特點以及與其他細胞器或細胞結構的相對位置關系。

圖像采集與分析：使用顯微鏡自帶的成像系統(tǒng)采集細胞和細胞器圖像。利用圖像分析軟件，如 NIS - Elements 軟件，測量細胞器的大小、數量、熒光強度等參數，還可通過對不同熒光通道圖像的疊加和分析，研究細胞器間的相互關系和空間分布規(guī)律。